การพัฒนาอิมมูโนโครมาโตกราฟิก สตริป เทสสำหรับตรวจวัดลูโคมาลาไคธ์ กรีนที่ตกค้างในสัตว์น้ำ

Abstract

ลูโคมาลาไคธ์ กรีน เป็นสารที่เกิดจากการสลายของมาลาไคธ์ กรีนที่ใช้ในการฆ่าเชื้อราในสัตว์น้ำซึ่งจะสะสมอยู่ในบริเวณเนื้อเยื่อของสัตว์น้ำ ในกรณีที่มนุษย์บริโภคสัตว์น้ำที่มีการตกค้างของลูโคมาลาไคธ์กรีน ทำให้เป็นโรคมะเร็ง ทารกในครรภ์เกิดความผิดปกติ และทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงทางพันธุกรรมดังนั้นงานวิจัยนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อพัฒนาอิมมูโนโครมาโตกราฟิก สตริป เทส สำหรับตรวจวัดลูโคมาลา-ไคธ์ กรีนที่ตกค้างในสัตว์น้ำ ซึ่งอาศัยหลักการทางอิมมูโนเซนเซอร์แบบแข่งขัน ศึกษาสภาวะที่เหมาะสมของอิมมูโนโครมาโตกราฟิก สตริป เทส ผลการทดลองพบว่าแอนติบอดีทุติยภูมิสำหรับเส้นควบคุมเท่ากับ 0.1 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ปริมาตร 1 ไมโครลิตร ความเข้มข้นและปริมาตรที่เหมาะสมของแอนติบอดีลูโคมาลาไคธ์ กรีนเชื่อมอนุภาคนาโนทอง เท่ากับ 0.0025 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตรและปริมาตร 20 ไมโครลิตร ตามลำดับ ปริมาตรสารตัวอย่างเท่ากับ 140 ไมโครลิตร และเวลาในการตรวจวิเคราะห์เท่ากับ 5 นาที จากนั้นศึกษาประสิทธิภาพของอิมมูโนโครมาโตกราฟิก สตริป เทสผลการทดลองพบว่ามีความเที่ยง ความถูกต้องและความจำเพาะเจาะจงสูง โดยมีความเข้มข้นที่เป็นเส้นตรงอยู่ในช่วง 0.7 - 2 ไมโครกรัมต่อลิตร มีขีดจำกัดในการตรวจพบและขีดจำกัดในการตรวจพบเชิงปริมาณเท่ากับ 0.24 และ 0.80 ไมโครกรัมต่อลิตร ตามลำดับ จากนั้นนำอิมมูโนโครมาโตกราฟิก สตริป เทสไปตรวจหาลูโคมาลาไคธ์ กรีนในตัวอย่างจริงพบว่าในทุกตัวอย่างไม่มีการปนเปื้อนของลูโคมาลาไคธ์ กรีน ข้อดีของอิมมูโนโครมาโตกราฟิก สตริป เทสที่พัฒนาขึ้น คือ ง่าย รวดเร็ว และสามารถตรวจวัดในภาคสนามได้

Leucomalachite green is major reduced metabolite of malachite green, which was used as fungicide in aquatic animals. It was left and stored in the tissue of aquatic animals. The consumption of the contaminated leucomalachite green aquatic animals caused cancer, fetal abnormalities, and mutagenic. Therefore, the objective of this research was to develop the immunochromatographic strip test using competitive immunosensor for detection of leucomalachite green residual in aquatic animals. The results revealed that the optimum conditions of the immunochromatographic strip test were as followed. The concentration of secondary antibody for control line was 0.1 mg/mL at the volume of 1 UL. The optimal concentration and volume of the LMG pAbcolloidalgold conjugate were 0.0025 mg/mL and 20 UL, respectively. The sample volume was 140 UL and the test time was 5 minutes. It was found that the immunochromatographic strip test performed high precision, accuracy, and specificity with a linear range of the concentration of 0.7 - 2 Ug/L. The limit of detection and the limit of quantitation were at 0.24 and 0.80 Ug/L, respectively. After that, the immunochromatographic strip test was used for detection of leucomalachite green in the real samples and it showed that all samples were not contaminated with leucomalachite green. The advantage of the developed immunochromatographic strip test was that it was simple, rapid and suitable for on-sitedetection.